香菇ras和gpd啟動(dòng)子的克隆與功能鑒定 于曉玲　 林俊芳　 郭麗瓊　 王樹(shù)昌　 摘　要：以香菇基因組DNA為模板,利用PCR技術(shù)克隆了香菇1個(gè)ras啟動(dòng)子Lras,2個(gè)gpd啟動(dòng)子Lgpd1和Lgpd2.這3個(gè)啟動(dòng)子的大小分別為715bp、1056bp和611bp,與已報(bào)道的ras和gpd啟動(dòng)子的同源性很強(qiáng).對(duì)這3個(gè)啟動(dòng)子的分析結(jié)果表明,它們都含有豐富的啟動(dòng)子順式作用元件.將這些啟動(dòng)子片段分別與GUS基因連接構(gòu)建了表達(dá)載體,并將這些表達(dá)載體導(dǎo)入草菇菌絲體中,檢測(cè)其活性,最終顯示3個(gè)片段都有啟動(dòng)GUS基因表達(dá)的能力,其中Lgpd1啟動(dòng)子活性最強(qiáng),Lras啟動(dòng)子次之,Lgpd2最弱. 關(guān)鍵詞：香菇;ras啟動(dòng)子;gpd啟動(dòng)子;原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化;GUS基因 分類號(hào)：S646.120.36 　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-9873(2005)03-0015-06 Cloning and Characterization of ras and gpd Promoters from Lentinus edodes Yu Xiao-ling　 Lin Jun-fang　 Guo Li-qiong　 Wang Shu-chang基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目"抗冷凍蛋白基因遺傳轉(zhuǎn)化草菇的研究"(編號(hào):39960050),"草菇冷凍脅迫誘導(dǎo)表達(dá)基因及其啟動(dòng)子的克隆分離"(編號(hào):30060054),"食用菌外源基因表達(dá)系統(tǒng)的建立"(編號(hào):30371000)和廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目"食用菌外源基因表達(dá)系統(tǒng)的建立"(編號(hào):032239)的部分研究?jī)?nèi)容 作者簡(jiǎn)介：于曉玲(1979-),女,2004年畢業(yè)于華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳育種專業(yè),碩士,助理研究員,主要從事基因工程與分子生物學(xué)研究. 作者單位：于曉玲（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,熱帶生物技術(shù)研究所,海口,571101）　 　　　　　林俊芳（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,熱帶生物技術(shù)研究所,海口,571101;華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院生物工程系,廣州,510640）　 　　　　　郭麗瓊（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,熱帶生物技術(shù)研究所,?？?571101;華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院生物工程系,廣州,510640）　 　　　　　王樹(shù)昌（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,熱帶生物技術(shù)研究所,?？?571101）　 參考文獻(xiàn)： [1]劉春如.香菇的分布概況及生物學(xué)特性[J].中國(guó)林副特產(chǎn),2001,11(4):32～33. [2]曲章義,牛美娟,郭彩玲.香菇多糖抗腫瘤作用機(jī)理[J].中國(guó)食用菌,1997,16(5):3～5. [3]芮菁.香菇多糖的藥理作用和臨床應(yīng)用概況[J].天津藥學(xué),2000,12(1):34～36. [4]Mooibroek H, Kuipers AGJ, Sietsma JH, et al. Introduction of hygromycin B resistance into Schizophyllum commune: Preferential methylation of donor DNA[J]. Mol Gen Genet, 1990,222:41～48. [5]Osamu Ishibashi, Kazuo Shishido. Nucleaotide sequence of a ras gene from the basidiomycete Coprinus cinereus [J]. Gene, 1993,125(2) :233～234. [6]Hori K, Kajiwara S, Saito T, et al. Cloning, sequence analysis and transcriptional expression of aras gene of the edible basidiomycete Lentinus edodes [J]. Gene, 1991,105(1) :91～96. [7]Challen MP, Bhattiprolu GR, Warner PJ. Cloning the Coprumus bilannatus TRP2 gene and it use as a selectable marker in transformation[J]. Mycology Research, 1994,98(2) :179～185. [8]Goodwen W, Pallas JA, Jenlins GI. Transcripts of a gene encoding a putative cell wall-plasma membrane linker protein are specifically cold-induced in Brassica napus [J ]. Plant Mol Biol, 1996,31:771～ 781. [9]Hirano T, Sato T, Yaegashi K, et al. Efficient transformation of the edible basidiomycete Lentinus edodes with a vector using a glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase promoter to hygromycin B resistance[J ].Molecular and General Genetics, 2000,263(6):1047～1052. [10]劉世強(qiáng),楊麗卿,郭麗瓊,等.草菇ras啟動(dòng)子區(qū)域的克隆及其序列分析[J].食用菌學(xué)報(bào),2004,11(1):1～6. [11]溫海洋,肖洪東,黃劍波,等.草菇種內(nèi)原生質(zhì)體融合育種研究[J].北方園藝,2000,3:48～49. [12]王春暉,喻初權(quán),張志光.外源DNA片段導(dǎo)入草菇原生質(zhì)體的研究[J].食用菌學(xué)報(bào),1999,6(4):1～6. [13]張志光,李東屏,方芳.絲狀真菌原生質(zhì)體技術(shù)研究[J].湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào),1998,21(1):60～65. [14]李東屏,張志光,張?zhí)鞎?草菇、銀絲草菇原生質(zhì)分離及再生試驗(yàn)[J].湖南微生物學(xué)通訊,1991,1(3):9～14. [15]儲(chǔ)成才,陳帥,司麗珍.轉(zhuǎn)基因表達(dá)的精細(xì)調(diào)控[J].杭州師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2001,18(4):43～44. [16]郭麗瓊,陳守才,林俊芳.食用菌遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J].食用菌學(xué)報(bào),2001,8(4):47～53. 食用菌學(xué)報(bào) 2005年第3期-HTM文件 No.3