草菇ras啟動子區(qū)域的克隆及其序列分析
Cloning and Sequence Analysis of ras Promoter Region from Volvariella volvacea
劉世強 楊麗卿 郭麗瓊 林俊芳
摘 要：根據(jù)Kajiwara S[1]等報道的ras啟動子的序列設計并合成一對特異引物,以草菇菌絲的總DNA為模板,通過PCR擴增,獲得一條長約0.75kb片段.DNA序列測定結果表明,該片段長度為751bp.采用Blast軟件和Promoter predictions軟件進行啟動子序列結構分析,結果表明,該片段中243～293 bp和539～589 bp兩區(qū)域為ras啟動子的基礎啟動子區(qū).在283bp和579bp處有兩個轉錄起始位點,在244～247bp和292～295bp之間有2個TATA box,在36～39bp、377～380bp、434～437bp和716～719bp之間有4個CAAT box.此外,該片段中還含有9個G box、12個Ⅰ box、2個P box以及3個重要順式作用元件:ABRE元件、WUN-motif(基元)和HSE元件.
關鍵詞：草菇; ras啟動子; PCR擴增; 序列分析
分類號：S646.130.6 文獻標識碼：A
文章編號：1005-9873(2004)01-0001-06
基金項目：國家自然科學基金資助項目(30060054和30371000)、廣東省自然科學基金資助項目(032239)和華南農(nóng)業(yè)大學校長基金項目(5100-k03003)的部分研究內(nèi)容
作者簡介：劉世強(1978-),男,華南熱帶農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院在讀碩士研究生,主要從事食用菌的基因工程研究與開發(fā).林俊芳,本文通訊作者
作者單位：劉世強（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室,?？?571701）
楊麗卿（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室,海口,571701）
郭麗瓊（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室,?？?571701;華南農(nóng)業(yè)大學食品學院生物工程系,廣州,510640）
林俊芳（中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室,?？?571701;華南農(nóng)業(yè)大學食品學院生物工程系,廣州,510640）
參考文獻：
［1］Kajiwara S,Shishido K.Characterization of the promoter region of the basidiomycete Lentinus edodes Le.ras gene[J].FEMS Microbiology letters,1992,92(2):147～150.
［2］Katsutoshi Hori, Susumu Kajiwara, Takeshi Saito, et al. Cloning, sequence analysis and transcriptional expression of a ras gene of the edible basidiomycete Lentinus edodes[J]. Gene, 1991,(105):91～96.
［3］Hall A , Brown R. Human N-ras: cDNA cloning and gene structure[J]. Nucleic Acids Res,1985, 13(14):5255～5268.
［4］Myers RM,Tilly K,Maniatis T.Fine structure genetic analysis of a beta-globin promoter[J].Science,1986, 232(4750):613～618.
［5］Kadonaga JT,Carner KR, Masiarz FR, et al.Isolation of cDNA encoding transcription factor Sp1 and functional analysis of the DNA binding domain[J].Cell,1987, 51(6):1079～1090.
［6］Bishop JG, Corces VG. Expression of an activated ras gene causes developmental abnormalities in transgenic Drosophila melanogaster[J]. Gene Dev,1988, 2(5):567～577.
［7］郭麗瓊,陳守才,林俊芳.食用菌遺傳轉化研究進展[J].食用菌學報,2001,8(4):47～53.
［8］Yanai K, Yonekura K, Usami H,et al. The integrative transformation of Pleurotus ostreatus using Bialaphos resistance as a dominant selectable marker[J]. Bioscience Biotechnology and Biochemistry,1996,60(3):472～475.
［9］Granado JD,Kertes-Chaloupkova, Aebi M, et al. Restriction enzyme-mediated DNA integration in Coprinus cinereus[J].Molecular and General Genetics,1997,256(1):28～36.
［10］Sato T,Yaegashi K, Ishll S, et al. Transformation of edible basidiomycete Lentinus edodes by restriction enzyme-mediated DNA integration of plasmid DNA[J]. Biosci. Biotechnol. Biochem.,1998,62(12):2346～2358.
［11］Ogawa K, Yamazaki T, Hasebe T,et al. Molecular breeding of the basidiomycete Coprinus cinereus strains with high lignin-decolorization and degradation activities using novel heterologous protein expression vectors[J]. Applied Microbiology and Biotechnology,1998,49(3):285～289.
［12］Joseph Sambrook, David W Russel(黃培堂譯).分子克隆實驗指南[M].北京:科學出版社,2002.26～27 ,96～99.
［13］孫曉紅,陳明杰,潘迎捷.啟動子克隆概述[J].食用菌學報,2002,9(3):57～62.
［14］Chan SJ,Oliva AA, La Mendola J, et al. Conservation of the prohormone convertase gene family in metazoa:analysis of cDNA encoding a PC3-like protein from hydra[J]. Proc Natl Acad Sci USA,1992,89(15):6678～6682.
［15］張曉寧,王昊,陳火英,等.藍藻啟動子活性片段的克隆及其序列分析[J].復旦大學學報(自然科學版),2002,41(2):227～229.
［16］陳明杰,汪昭月,賀冬梅,等.低溫影響草菇蛋白質組分變化的研究[J].食用菌學報,1995,2(4):28～31.
［17］張樹庭.草菇[M].香港:香港中文大學出版社,1978.143～147.
［18］Chang ST, Hayes WA.Volvariella volvacea in the biology and cultivation of edible fungi[M]. New York:Academic Press ,1978.573～605.
［19］Chang ST, Quimil TH. Tropical mushrooms biological nature and cultivation methods. Hong Kong: The Chinese University Press,1982.69～80.
［20］王富民,宮秀榮.草菇保鮮生理研究[J].食用菌,1990,12(6):37～38.
［21］王富民,宮秀榮.草菇保鮮及有關生理變化[J].上海農(nóng)業(yè)學報,1992,8(3):60～66.
［22］段學武,龐學群,張昭其.草菇低溫貯藏及有關生理變化研究[J].熱帶作物學報,2000, 21(4):75～79.
［23］鄭國揚, 廖漢泉.中國草菇生產(chǎn)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000.12～25.
