【作者】王建榮；張曼夫；

【機(jī)構(gòu)】上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所；北京農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院 上海 200030；北京 100094；

【摘要】本文以噬菌體lambda EMBL3 DNA為載體,通過克隆綠色木酶(Trichoderma viride)高分子量基因組DNA的部分酶解片段,并將重組分子進(jìn)行體外包裝后侵染Escherichia.coli K802,由此構(gòu)建了綠色木霉基因文庫(kù)。以李氏木霉(Trichoderma reesei)纖維素酶CBHII基因的末端片段為探針,用輪迥噬菌斑原位雜交從文庫(kù)中篩選出CBHII基因的陽(yáng)性克隆5個(gè),隨機(jī)取其中3個(gè)克隆用上述探針作斑點(diǎn)雜交,結(jié)果進(jìn)一步證明克隆了全長(zhǎng)或近全長(zhǎng)的綠色木霉CBHII基因,用李氏木霉CBHI基因的末端片段探針作斑點(diǎn)雜交,結(jié)果提示CBHI與CBHII基因的末端序列之間無同源性存在。從斑點(diǎn)雜交的陽(yáng)性克隆中提取DNA,酶切鑒定插入片段的長(zhǎng)度,并克隆于質(zhì)粒pUC19,Southern雜交結(jié)果證明獲得了含綠色木霉CBHII基因的重組質(zhì)粒pCBHII-14。   

【關(guān)鍵詞】木霉；纖維二糖水解酶；基因文庫(kù)；分子雜交；克隆；

【基金】國(guó)家高技術(shù)發(fā)展計(jì)劃863項(xiàng)目；江蘇省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目；

【分類號(hào)】Q943

【文內(nèi)圖片】