1.酸堿度調(diào)節(jié)
一般用10%鹽酸或10%氫氧化鈉調(diào)pH值。用pH值試紙進(jìn)行測試。調(diào)pH值時要小心,一滴一滴地加酸或堿,不要調(diào)得過酸或過堿,以避免某些營養(yǎng)成分被破壞。
在食用菌菌絲生長過程中,菌絲將碳水化合物分解成有機(jī)酸類,使培養(yǎng)基逐漸呈酸性;另外,有機(jī)酸類被同化后,培養(yǎng)基逐漸呈堿性。為防止培養(yǎng)基酸堿度出現(xiàn)大的波動,常在培養(yǎng)基中加人少量磷酸鹽作為緩沖液。
2.分裝
培養(yǎng)基配好后,趁熱將其按需要分裝于三角瓶或試管內(nèi),以免瓊脂冷凝。溫度低時,要保溫分裝。分裝時應(yīng)避免培養(yǎng)基黏附管口或瓶口。瓊脂若黏著棉塞,會影響接種,還易引起雜菌滋生。分裝用漏斗或橡膠管進(jìn)行。裝入三角瓶的培養(yǎng)基量,一般不要超過瓶容量的1/3;裝入試管中的量,最好不要超過管長的1/5。
3.塞棉塞
分裝后,塞好棉塞。做棉塞用普通棉花,不要用脫脂棉。棉塞的作用是既通氣又過濾空氣,避免雜菌污染培養(yǎng)基。
塞入試管的棉塞要緊貼管壁,不留縫隙,大小、松緊均勻適度。檢查松緊的方法是:將棉塞提起,試管跟著被提起而不下滑,表明棉塞不松;將棉塞拔出,可聽到有輕微的聲音而不明顯,表明棉塞不緊。
4.捆把
棉塞塞好后,每7支同樣規(guī)格的試管包扎成1把,試管棉塞部分要包上一層牛皮紙或雙層報紙,用繩捆扎在管壁或瓶頸上。包紙的作用是避免滅菌時冷凝水淋濕棉塞,并防止接種前培養(yǎng)基水分散失或被雜菌污染。
5.滅菌
試管包扎好后,放人鐵絲筐中,豎直放人高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。在壓力升至0.05MPa時排放冷空氣, 然后再在0.11MPa下滅菌20~30min。滅菌時間不能過長,否則易破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,使酸度增加、凝固不良。滅菌后待溫度緩慢降到60℃時再擺成斜面,以防冷凝水在管內(nèi)積聚過多。
6.擺斜面
擺放方法是將1cm厚的木板或鋼板平放于平臺或地上,然后將滅過菌的試管口朝上擺放于板上冷卻凝固即成斜面培養(yǎng)基。擺放后在試管上覆蓋棉布保溫也可減少冷凝水過多。斜面長度占試管總長的1/2,最多不超過3/5。
一般用10%鹽酸或10%氫氧化鈉調(diào)pH值。用pH值試紙進(jìn)行測試。調(diào)pH值時要小心,一滴一滴地加酸或堿,不要調(diào)得過酸或過堿,以避免某些營養(yǎng)成分被破壞。
在食用菌菌絲生長過程中,菌絲將碳水化合物分解成有機(jī)酸類,使培養(yǎng)基逐漸呈酸性;另外,有機(jī)酸類被同化后,培養(yǎng)基逐漸呈堿性。為防止培養(yǎng)基酸堿度出現(xiàn)大的波動,常在培養(yǎng)基中加人少量磷酸鹽作為緩沖液。
2.分裝
培養(yǎng)基配好后,趁熱將其按需要分裝于三角瓶或試管內(nèi),以免瓊脂冷凝。溫度低時,要保溫分裝。分裝時應(yīng)避免培養(yǎng)基黏附管口或瓶口。瓊脂若黏著棉塞,會影響接種,還易引起雜菌滋生。分裝用漏斗或橡膠管進(jìn)行。裝入三角瓶的培養(yǎng)基量,一般不要超過瓶容量的1/3;裝入試管中的量,最好不要超過管長的1/5。
3.塞棉塞
分裝后,塞好棉塞。做棉塞用普通棉花,不要用脫脂棉。棉塞的作用是既通氣又過濾空氣,避免雜菌污染培養(yǎng)基。
塞入試管的棉塞要緊貼管壁,不留縫隙,大小、松緊均勻適度。檢查松緊的方法是:將棉塞提起,試管跟著被提起而不下滑,表明棉塞不松;將棉塞拔出,可聽到有輕微的聲音而不明顯,表明棉塞不緊。
4.捆把
棉塞塞好后,每7支同樣規(guī)格的試管包扎成1把,試管棉塞部分要包上一層牛皮紙或雙層報紙,用繩捆扎在管壁或瓶頸上。包紙的作用是避免滅菌時冷凝水淋濕棉塞,并防止接種前培養(yǎng)基水分散失或被雜菌污染。
5.滅菌
試管包扎好后,放人鐵絲筐中,豎直放人高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌。在壓力升至0.05MPa時排放冷空氣, 然后再在0.11MPa下滅菌20~30min。滅菌時間不能過長,否則易破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分,使酸度增加、凝固不良。滅菌后待溫度緩慢降到60℃時再擺成斜面,以防冷凝水在管內(nèi)積聚過多。
6.擺斜面
擺放方法是將1cm厚的木板或鋼板平放于平臺或地上,然后將滅過菌的試管口朝上擺放于板上冷卻凝固即成斜面培養(yǎng)基。擺放后在試管上覆蓋棉布保溫也可減少冷凝水過多。斜面長度占試管總長的1/2,最多不超過3/5。