制種是食用菌生產(chǎn)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，菌種好壞直接影響食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量。菌種的好壞又取決于多個(gè)因素，如培養(yǎng)基的制備、種源質(zhì)量、接種技術(shù)、保存條件等等。按菌種培養(yǎng)的不同階段，可分為母種、原種和栽培種三類。母種質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響到原種和栽培種的質(zhì)量，所以說在把關(guān)母種質(zhì)量環(huán)節(jié)上；各種影響因素顯得尤為重要。母種培養(yǎng)基的制備看似簡單，要真正做好也非易事。現(xiàn)在有許多栽培戶自己制作母種，由于制作規(guī)程不嚴(yán)格，極易出現(xiàn)問題，又由于缺乏系統(tǒng)的專業(yè)知識(shí)，出現(xiàn)問題也不會(huì)解決，致使菌種污染，造成損失?，F(xiàn)就如何提高制作母種培養(yǎng)基的質(zhì)量，通過制作過程中的幾點(diǎn)注意事項(xiàng)進(jìn)行闡述，希望給從事菌種制作的技術(shù)人員和食用菌栽培戶提供借鑒和幫助。
馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）適合多類食用菌菌絲生長，在制備母種培養(yǎng)基中多以PDA為主，現(xiàn)以PDA為例闡述母種培養(yǎng)基制備中的幾點(diǎn)注意事項(xiàng)。在PDA的制作過程中一般分為材料準(zhǔn)備、培養(yǎng)基制作、培養(yǎng)基分裝、滅菌、冷卻五個(gè)步驟。以下就每個(gè)步驟注意事項(xiàng)分別進(jìn)行闡述：
1 材料準(zhǔn)備
1.1 注意在選取土豆時(shí)，應(yīng)選用無生芽、無青斑的土豆，因?yàn)橥炼寡坎康亩舅貢?huì)影響到菌絲的生長，若在保存過程中土豆生芽，可將芽部徹底清除再用。
1.2 在土豆去皮后，一般切成厚度為0.2cm的薄片，因?yàn)橥炼蛊拇笮?、薄厚?huì)影響相同時(shí)間內(nèi)煮制的效果，如果切的較厚，煮制時(shí)間較短，就會(huì)影響土豆?fàn)I養(yǎng)汁液的獲取量，繼而影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。一般0.2cm厚的土豆片煮制時(shí)間控制在10min為宜。
1.3 在培養(yǎng)基制作中，要用到起凝固作用的瓊脂條或瓊脂粉，在實(shí)際操作中考慮到成本問題，多選用瓊脂條，但瓊脂條加熱后不容易溶化，如果培養(yǎng)基中留有未溶化的瓊脂條，就會(huì)影響到培養(yǎng)基的凝固效果。解決辦法是將稱量好的瓊脂條用熱水提前浸泡，讓瓊脂條充分吸水軟化，便于加熱溶化。注意：在夏季制備培養(yǎng)基時(shí)瓊脂條的使用量可增加2～4g，便于高溫時(shí)的凝固。
1.4 注意在煮土豆片前的加水量，以做1000mL為例，在煮制之前要加水1200～1300mL，由于在煮制過程中水分會(huì)不斷蒸發(fā)，致使部分水分散失，所以在煮制前將會(huì)蒸發(fā)散失掉的200～300mL水補(bǔ)充進(jìn)去。這樣避免因煮制好后水量不足，加入清水造成營養(yǎng)液稀釋現(xiàn)象。
2 培養(yǎng)基制作
2.1 將切好的土豆片加入到1200～1300mL水中，先用大火煮至開鍋后計(jì)時(shí)，再用文火煮10min后?；?，冷卻過濾。注意計(jì)時(shí)后用文火煮，不要盲目的認(rèn)為大火煮制會(huì)將土豆中的營養(yǎng)全部煮出來，大火煮制不但會(huì)將土豆煮爛煮粘，還會(huì)把土豆中的大量淀粉混于營養(yǎng)液中，不利于過濾。注意文火煮制時(shí)，讓水略微沸騰即可，鍋蓋虛掩防止水分大量散失。
2.2 將煮好后的土豆汁液經(jīng)4層紗布過濾，注意至少用4層紗布過濾，目的是為了將煮出的土豆?fàn)I養(yǎng)液充分的過濾出來，并排除其他雜質(zhì)。通過紗布過濾出超過1000mL營養(yǎng)汁，超過1000mL是為了在溶化瓊脂的過程中彌補(bǔ)水分蒸發(fā)的缺失。
2.3 在加熱溶化瓊脂階段注意，加熱溶化時(shí)火不要太急，用玻璃棒一邊攪拌瓊脂一邊溶化，防止瓊脂沉于鍋底而糊鍋。加熱至沸騰時(shí)，將火調(diào)至文火繼續(xù)加熱攪拌，直到用玻璃棒從鍋底挑不出未溶化的瓊脂為止，注意保持營養(yǎng)液1000mL。
3 培養(yǎng)基的分裝
3.1 要提前準(zhǔn)備分裝培養(yǎng)液的試管，并要注意：試管一定要刷洗干凈（有條件的可用餐洗凈或其它洗潔凈），倒置瀝干水分；成裝試管的容器不要封閉，封閉的容器不利于水分散失 （有條件的可用烘箱烘干）。試管中若殘留水分會(huì)導(dǎo)致滅好菌的試管中水份過大影響接種和發(fā)菌。
3.2 分裝培養(yǎng)液時(shí)一定要在培養(yǎng)液溫度較高時(shí)分裝，不但分裝速度快而且培養(yǎng)液不易凝固。培養(yǎng)液分裝時(shí)一般采用醫(yī)用膠皮管將培養(yǎng)液導(dǎo)流入試管，注意將膠皮管插入試管內(nèi)一段距離，不要接觸管口，不要將培養(yǎng)液粘到管口。一般試管的裝液量占試管容積的2/5，以這個(gè)容量斜面擺放試管時(shí)，不致于斜面過短影響試管利用率或斜面過長接觸到棉塞增加污染機(jī)率。
3.3 將分裝好的試管冷卻一下進(jìn)行棉塞封口，注意盡量用新做的棉塞，用過的棉塞在受潮后極易滋生雜菌。在制作棉塞時(shí)注意，由里到外將棉塞依次裹緊，不要松散，將做好的棉塞塞入管口內(nèi)2/3，管口外留1/3，棉塞做的要松緊適宜，以將棉塞拔出管口聽到砰的一聲響為宜。注意在塞入棉塞前要將管口擦凈，不要有殘留的培養(yǎng)基，殘留的培養(yǎng)基滅菌后不但會(huì)與管口粘合致使棉塞拔不出，而且在發(fā)菌過程中管口的培養(yǎng)基極易污染到雜菌。
3.4 滅菌前一般要用牛皮紙將試管包裹（7支/把），牛皮紙隔水透氣是最理想的滅菌包裹材料，也可重復(fù)使用。許多農(nóng)戶自己在制作試管時(shí)，為了降低成本一般采用報(bào)紙包裹，建議在用報(bào)紙包裹時(shí)最好采用雙層報(bào)紙包裹，因報(bào)紙?jiān)跍缇袠O易吸水破裂讓棉塞暴露在空氣中，增加污染機(jī)率。若將試管作為菌種保藏時(shí)，不建議用報(bào)紙包裹，因?yàn)閳?bào)紙?jiān)?～4℃低溫冰箱保存時(shí)，極易吸收冰箱內(nèi)的濕氣造成管口棉塞受潮，增加污染機(jī)率縮短保藏時(shí)間。
4 滅菌
4.1 現(xiàn)在許多農(nóng)戶在自己制作試管培養(yǎng)基時(shí)常用高壓鍋代替，用高壓鍋滅菌不易掌握滅菌的準(zhǔn)度，改裝過的高壓鍋?zhàn)陨硪泊嬖谥踩[患，所以在滅菌試管時(shí)最好用正規(guī)的醫(yī)用滅菌鍋。
4.2 高壓蒸汽滅菌是利用蒸汽在高壓作用下的穿透力達(dá)到滅菌的效果，所以在滅菌前要在鍋與內(nèi)膽之間加適量的水，水的適量度在平與鍋底內(nèi)的三腳架為宜，水量過多會(huì)造成滅完菌的試管濕度過大，水量過少會(huì)滿足不了滅菌過程中的需要。
4.3 在鍋蓋密封時(shí)注意，不要將螺絲逐個(gè)上緊，要把每個(gè)螺絲卡好，以相對(duì)方向的螺絲平衡用力擰上，注意不要太緊，所有螺絲擰好后再用力將相對(duì)的螺絲平衡用力擰緊。這樣做不但可以將鍋蓋密封緊密而且還可以避免漏氣現(xiàn)象發(fā)生，延長高壓鍋的使用壽命。
4.4 滅菌過程中的放氣是至關(guān)重要的，放氣閥緊連的金屬管直通到內(nèi)膽底部，目的就是在放氣時(shí)將底部空氣完全排凈，若排不凈空氣，空氣自身產(chǎn)生的壓強(qiáng)會(huì)占據(jù)壓力表上顯示的總壓強(qiáng)，降低水蒸氣產(chǎn)生的壓強(qiáng)，誤認(rèn)為滅菌鍋內(nèi)的滅菌壓強(qiáng)已達(dá)到滅菌要求，最終造成滅菌不徹底。所以在排氣時(shí)注意大火加溫至壓力表指針達(dá)到0.05Pa時(shí)打開放氣閥放氣，待指針降下來后重復(fù)上述操作直到放氣閥噴出大量霧狀水蒸氣為止。
4.5 放完氣后繼續(xù)加熱待指針指到121℃或0.12Pa時(shí)，通過斷電或?；鹱屩羔樉S持不變計(jì)時(shí)30min，注意在維持壓力計(jì)時(shí)時(shí)一定要留有專人看管，切忌滅菌時(shí)一心多用，嚴(yán)防壓力過高造成危險(xiǎn)。
4.6 計(jì)時(shí)完畢后，停止加熱讓高壓鍋?zhàn)匀焕鋮s，冷卻至0.05h以下即可放氣，注意放氣時(shí)應(yīng)輕提放氣閥，不要猛提放氣閥，由于鍋內(nèi)壓力過大會(huì)造成水蒸氣外噴范圍較大，要謹(jǐn)防燙傷操作者。還應(yīng)切忌當(dāng)壓力還未降至0.05h而打開放氣閥，不但會(huì)有燙傷的危險(xiǎn)，更重要的是產(chǎn)生的巨大壓差會(huì)使試管內(nèi)的培養(yǎng)基沸騰，造成培養(yǎng)基外溢污染棉塞，嚴(yán)重者試管會(huì)在鍋內(nèi)爆裂。
5 冷卻
5.1 當(dāng)壓力表降至0時(shí)，待鍋體略微冷卻，擰開螺絲打開鍋蓋，注意不要將試管立即拿出，由于鍋內(nèi)水蒸氣含量較大，試管內(nèi)及棉塞含水量也較大，直接冷卻會(huì)導(dǎo)致試管內(nèi)有冷凝水及棉塞含水量過大，影響接種、發(fā)菌，還會(huì)加大管口處污染的機(jī)率。打開鍋蓋后，讓鍋內(nèi)大量的水蒸氣散發(fā)將試管內(nèi)及棉塞中的水氣帶走一些，直到包裹試管的紙張見干時(shí)即可拿出擺斜面。
5.2 擺斜面的環(huán)境要求潔凈，因?yàn)樾泵鏀[放環(huán)節(jié)是高壓滅菌和無菌接種之間試管培養(yǎng)基與環(huán)境接觸的中間環(huán)節(jié)，為降低.試管培養(yǎng)基污染的機(jī)率，擺斜面的環(huán)境要求潔凈、定期滅菌。
5.3 擺斜面時(shí)要趁培養(yǎng)基未凝固前擺放，注意擺放前要朋試管傾斜一定角度旋轉(zhuǎn)一周將試管內(nèi)壁上附著的水珠溶于培養(yǎng)基內(nèi)，降低冷卻后試管內(nèi)的含水量。
5.4 擺放時(shí)將管口墊起一定高度，使試管內(nèi)的液體培養(yǎng)基傾斜，斜面長度可占試管長度的3/5，注意不要將斜面擺的過長、距離棉塞過近，因?yàn)榫z在生長過程中接觸到棉塞會(huì)極易污染雜菌。
5.5 如果制作的試管培養(yǎng)基是為了保存菌種，擺放斜面時(shí)注意要讓培養(yǎng)基充分填充試管半球狀的末端，目的是延長試管菌種的保存時(shí)間。
5.6 注意在用制作好的試管培養(yǎng)基接種前要檢查試管培養(yǎng)基的滅菌效果，這一步非常關(guān)鍵。夏季溫度較高，斜面培養(yǎng)基放置12h即可；冬季溫度較低，斜面培養(yǎng)基要放置24h，有條件可放入恒溫箱內(nèi)12h。將放置好的斜面培養(yǎng)基對(duì)著光源觀察培養(yǎng)基斜面，若斜面光滑證明滅菌徹底無雜菌污染，若斜面不光滑（有細(xì)菌狀、霉菌狀等）表明滅菌不徹底，需要重新滅菌。
以上是在實(shí)際制作母種培養(yǎng)基中總結(jié)的幾點(diǎn)注意事項(xiàng)，通過了解制作母種培養(yǎng)基的每個(gè)步驟和注意事項(xiàng)，希望能對(duì)從事菌種制作的技術(shù)人員和食用菌栽培戶有所借鑒和幫助。
馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）適合多類食用菌菌絲生長，在制備母種培養(yǎng)基中多以PDA為主，現(xiàn)以PDA為例闡述母種培養(yǎng)基制備中的幾點(diǎn)注意事項(xiàng)。在PDA的制作過程中一般分為材料準(zhǔn)備、培養(yǎng)基制作、培養(yǎng)基分裝、滅菌、冷卻五個(gè)步驟。以下就每個(gè)步驟注意事項(xiàng)分別進(jìn)行闡述：
1 材料準(zhǔn)備
1.1 注意在選取土豆時(shí)，應(yīng)選用無生芽、無青斑的土豆，因?yàn)橥炼寡坎康亩舅貢?huì)影響到菌絲的生長，若在保存過程中土豆生芽，可將芽部徹底清除再用。
1.2 在土豆去皮后，一般切成厚度為0.2cm的薄片，因?yàn)橥炼蛊拇笮?、薄厚?huì)影響相同時(shí)間內(nèi)煮制的效果，如果切的較厚，煮制時(shí)間較短，就會(huì)影響土豆?fàn)I養(yǎng)汁液的獲取量，繼而影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。一般0.2cm厚的土豆片煮制時(shí)間控制在10min為宜。
1.3 在培養(yǎng)基制作中，要用到起凝固作用的瓊脂條或瓊脂粉，在實(shí)際操作中考慮到成本問題，多選用瓊脂條，但瓊脂條加熱后不容易溶化，如果培養(yǎng)基中留有未溶化的瓊脂條，就會(huì)影響到培養(yǎng)基的凝固效果。解決辦法是將稱量好的瓊脂條用熱水提前浸泡，讓瓊脂條充分吸水軟化，便于加熱溶化。注意：在夏季制備培養(yǎng)基時(shí)瓊脂條的使用量可增加2～4g，便于高溫時(shí)的凝固。
1.4 注意在煮土豆片前的加水量，以做1000mL為例，在煮制之前要加水1200～1300mL，由于在煮制過程中水分會(huì)不斷蒸發(fā)，致使部分水分散失，所以在煮制前將會(huì)蒸發(fā)散失掉的200～300mL水補(bǔ)充進(jìn)去。這樣避免因煮制好后水量不足，加入清水造成營養(yǎng)液稀釋現(xiàn)象。
2 培養(yǎng)基制作
2.1 將切好的土豆片加入到1200～1300mL水中，先用大火煮至開鍋后計(jì)時(shí)，再用文火煮10min后?；?，冷卻過濾。注意計(jì)時(shí)后用文火煮，不要盲目的認(rèn)為大火煮制會(huì)將土豆中的營養(yǎng)全部煮出來，大火煮制不但會(huì)將土豆煮爛煮粘，還會(huì)把土豆中的大量淀粉混于營養(yǎng)液中，不利于過濾。注意文火煮制時(shí)，讓水略微沸騰即可，鍋蓋虛掩防止水分大量散失。
2.2 將煮好后的土豆汁液經(jīng)4層紗布過濾，注意至少用4層紗布過濾，目的是為了將煮出的土豆?fàn)I養(yǎng)液充分的過濾出來，并排除其他雜質(zhì)。通過紗布過濾出超過1000mL營養(yǎng)汁，超過1000mL是為了在溶化瓊脂的過程中彌補(bǔ)水分蒸發(fā)的缺失。
2.3 在加熱溶化瓊脂階段注意，加熱溶化時(shí)火不要太急，用玻璃棒一邊攪拌瓊脂一邊溶化，防止瓊脂沉于鍋底而糊鍋。加熱至沸騰時(shí)，將火調(diào)至文火繼續(xù)加熱攪拌，直到用玻璃棒從鍋底挑不出未溶化的瓊脂為止，注意保持營養(yǎng)液1000mL。
3 培養(yǎng)基的分裝
3.1 要提前準(zhǔn)備分裝培養(yǎng)液的試管，并要注意：試管一定要刷洗干凈（有條件的可用餐洗凈或其它洗潔凈），倒置瀝干水分；成裝試管的容器不要封閉，封閉的容器不利于水分散失 （有條件的可用烘箱烘干）。試管中若殘留水分會(huì)導(dǎo)致滅好菌的試管中水份過大影響接種和發(fā)菌。
3.2 分裝培養(yǎng)液時(shí)一定要在培養(yǎng)液溫度較高時(shí)分裝，不但分裝速度快而且培養(yǎng)液不易凝固。培養(yǎng)液分裝時(shí)一般采用醫(yī)用膠皮管將培養(yǎng)液導(dǎo)流入試管，注意將膠皮管插入試管內(nèi)一段距離，不要接觸管口，不要將培養(yǎng)液粘到管口。一般試管的裝液量占試管容積的2/5，以這個(gè)容量斜面擺放試管時(shí)，不致于斜面過短影響試管利用率或斜面過長接觸到棉塞增加污染機(jī)率。
3.3 將分裝好的試管冷卻一下進(jìn)行棉塞封口，注意盡量用新做的棉塞，用過的棉塞在受潮后極易滋生雜菌。在制作棉塞時(shí)注意，由里到外將棉塞依次裹緊，不要松散，將做好的棉塞塞入管口內(nèi)2/3，管口外留1/3，棉塞做的要松緊適宜，以將棉塞拔出管口聽到砰的一聲響為宜。注意在塞入棉塞前要將管口擦凈，不要有殘留的培養(yǎng)基，殘留的培養(yǎng)基滅菌后不但會(huì)與管口粘合致使棉塞拔不出，而且在發(fā)菌過程中管口的培養(yǎng)基極易污染到雜菌。
3.4 滅菌前一般要用牛皮紙將試管包裹（7支/把），牛皮紙隔水透氣是最理想的滅菌包裹材料，也可重復(fù)使用。許多農(nóng)戶自己在制作試管時(shí)，為了降低成本一般采用報(bào)紙包裹，建議在用報(bào)紙包裹時(shí)最好采用雙層報(bào)紙包裹，因報(bào)紙?jiān)跍缇袠O易吸水破裂讓棉塞暴露在空氣中，增加污染機(jī)率。若將試管作為菌種保藏時(shí)，不建議用報(bào)紙包裹，因?yàn)閳?bào)紙?jiān)?～4℃低溫冰箱保存時(shí)，極易吸收冰箱內(nèi)的濕氣造成管口棉塞受潮，增加污染機(jī)率縮短保藏時(shí)間。
4 滅菌
4.1 現(xiàn)在許多農(nóng)戶在自己制作試管培養(yǎng)基時(shí)常用高壓鍋代替，用高壓鍋滅菌不易掌握滅菌的準(zhǔn)度，改裝過的高壓鍋?zhàn)陨硪泊嬖谥踩[患，所以在滅菌試管時(shí)最好用正規(guī)的醫(yī)用滅菌鍋。
4.2 高壓蒸汽滅菌是利用蒸汽在高壓作用下的穿透力達(dá)到滅菌的效果，所以在滅菌前要在鍋與內(nèi)膽之間加適量的水，水的適量度在平與鍋底內(nèi)的三腳架為宜，水量過多會(huì)造成滅完菌的試管濕度過大，水量過少會(huì)滿足不了滅菌過程中的需要。
4.3 在鍋蓋密封時(shí)注意，不要將螺絲逐個(gè)上緊，要把每個(gè)螺絲卡好，以相對(duì)方向的螺絲平衡用力擰上，注意不要太緊，所有螺絲擰好后再用力將相對(duì)的螺絲平衡用力擰緊。這樣做不但可以將鍋蓋密封緊密而且還可以避免漏氣現(xiàn)象發(fā)生，延長高壓鍋的使用壽命。
4.4 滅菌過程中的放氣是至關(guān)重要的，放氣閥緊連的金屬管直通到內(nèi)膽底部，目的就是在放氣時(shí)將底部空氣完全排凈，若排不凈空氣，空氣自身產(chǎn)生的壓強(qiáng)會(huì)占據(jù)壓力表上顯示的總壓強(qiáng)，降低水蒸氣產(chǎn)生的壓強(qiáng)，誤認(rèn)為滅菌鍋內(nèi)的滅菌壓強(qiáng)已達(dá)到滅菌要求，最終造成滅菌不徹底。所以在排氣時(shí)注意大火加溫至壓力表指針達(dá)到0.05Pa時(shí)打開放氣閥放氣，待指針降下來后重復(fù)上述操作直到放氣閥噴出大量霧狀水蒸氣為止。
4.5 放完氣后繼續(xù)加熱待指針指到121℃或0.12Pa時(shí)，通過斷電或?；鹱屩羔樉S持不變計(jì)時(shí)30min，注意在維持壓力計(jì)時(shí)時(shí)一定要留有專人看管，切忌滅菌時(shí)一心多用，嚴(yán)防壓力過高造成危險(xiǎn)。
4.6 計(jì)時(shí)完畢后，停止加熱讓高壓鍋?zhàn)匀焕鋮s，冷卻至0.05h以下即可放氣，注意放氣時(shí)應(yīng)輕提放氣閥，不要猛提放氣閥，由于鍋內(nèi)壓力過大會(huì)造成水蒸氣外噴范圍較大，要謹(jǐn)防燙傷操作者。還應(yīng)切忌當(dāng)壓力還未降至0.05h而打開放氣閥，不但會(huì)有燙傷的危險(xiǎn)，更重要的是產(chǎn)生的巨大壓差會(huì)使試管內(nèi)的培養(yǎng)基沸騰，造成培養(yǎng)基外溢污染棉塞，嚴(yán)重者試管會(huì)在鍋內(nèi)爆裂。
5 冷卻
5.1 當(dāng)壓力表降至0時(shí)，待鍋體略微冷卻，擰開螺絲打開鍋蓋，注意不要將試管立即拿出，由于鍋內(nèi)水蒸氣含量較大，試管內(nèi)及棉塞含水量也較大，直接冷卻會(huì)導(dǎo)致試管內(nèi)有冷凝水及棉塞含水量過大，影響接種、發(fā)菌，還會(huì)加大管口處污染的機(jī)率。打開鍋蓋后，讓鍋內(nèi)大量的水蒸氣散發(fā)將試管內(nèi)及棉塞中的水氣帶走一些，直到包裹試管的紙張見干時(shí)即可拿出擺斜面。
5.2 擺斜面的環(huán)境要求潔凈，因?yàn)樾泵鏀[放環(huán)節(jié)是高壓滅菌和無菌接種之間試管培養(yǎng)基與環(huán)境接觸的中間環(huán)節(jié)，為降低.試管培養(yǎng)基污染的機(jī)率，擺斜面的環(huán)境要求潔凈、定期滅菌。
5.3 擺斜面時(shí)要趁培養(yǎng)基未凝固前擺放，注意擺放前要朋試管傾斜一定角度旋轉(zhuǎn)一周將試管內(nèi)壁上附著的水珠溶于培養(yǎng)基內(nèi)，降低冷卻后試管內(nèi)的含水量。
5.4 擺放時(shí)將管口墊起一定高度，使試管內(nèi)的液體培養(yǎng)基傾斜，斜面長度可占試管長度的3/5，注意不要將斜面擺的過長、距離棉塞過近，因?yàn)榫z在生長過程中接觸到棉塞會(huì)極易污染雜菌。
5.5 如果制作的試管培養(yǎng)基是為了保存菌種，擺放斜面時(shí)注意要讓培養(yǎng)基充分填充試管半球狀的末端，目的是延長試管菌種的保存時(shí)間。
5.6 注意在用制作好的試管培養(yǎng)基接種前要檢查試管培養(yǎng)基的滅菌效果，這一步非常關(guān)鍵。夏季溫度較高，斜面培養(yǎng)基放置12h即可；冬季溫度較低，斜面培養(yǎng)基要放置24h，有條件可放入恒溫箱內(nèi)12h。將放置好的斜面培養(yǎng)基對(duì)著光源觀察培養(yǎng)基斜面，若斜面光滑證明滅菌徹底無雜菌污染，若斜面不光滑（有細(xì)菌狀、霉菌狀等）表明滅菌不徹底，需要重新滅菌。
以上是在實(shí)際制作母種培養(yǎng)基中總結(jié)的幾點(diǎn)注意事項(xiàng)，通過了解制作母種培養(yǎng)基的每個(gè)步驟和注意事項(xiàng)，希望能對(duì)從事菌種制作的技術(shù)人員和食用菌栽培戶有所借鑒和幫助。
