【作者】周凱松 常寧 彭俊峰 張晗星 張長(zhǎng)鎧

【機(jī)構(gòu)】山東大學(xué)微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 山東大學(xué)微生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 濟(jì)南250100

【摘要】采用QuickPrepmicromRNAPurification試劑盒從新鮮金針菇子實(shí)體中快速提取、純化mRNA,TimeSavercDNASynthesis試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA分子后,通過(guò)在cDNA分子兩端加上EcoRⅠ/NotⅠ接頭,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,與表達(dá)載體λZAPExpressPredigestedVector連接,然后用包裝蛋白在體外包裝連接產(chǎn)物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ殺澩颿DNA文庫(kù)。經(jīng)檢測(cè):文庫(kù)滴度為4.0×106pfu/ml,文庫(kù)擴(kuò)增后,滴度達(dá)2.0×1010pfu/ml,重組率為90%,cDNA分子長(zhǎng)度在0.3-3.5Kb范圍。應(yīng)用原位免疫雜交,初步篩選出火菇素相關(guān)基因的陽(yáng)性克隆。 

【基金】教育部博士點(diǎn)基金(No. 2000042212)；

【關(guān)鍵詞】滴度; 重組率; 免疫篩選;