我們總結(jié)的平菇菌種提純法簡便易行,污染率低,很適于設(shè)備簡陋的農(nóng)村應用
1. 褶片貼附分離法
利用成熟菇體的菌蓋所產(chǎn)生的孢子進行培養(yǎng)而獲得純正菌種。其過程是:首先制備好PDA試管斜面培養(yǎng)基。配備培養(yǎng)基的用品是馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20克、水1000毫升。將試管存放在14℃~18℃環(huán)境中干燥2天~3天,當試管壁上沒有游離水珠時,即可進行分離,方法是:選用菇形圓整、菌蓋肥厚、健壯、無病蟲危害、七八成熟的平菇作為分離菌種原材料,在黑暗處借用手電筒的光束,可看到形似白色粉筆灰狀的孢子彈射的狀況。平菇孢子的成熟次序是由基部,即靠近菇體菌柄的一端呈帶狀向前緣推移,在其菌蓋前緣隆起處便是孢子彈射最活躍的部位,在此處剪一段,約1厘米~1.5厘米寬的菌褶,用鑷子剝?nèi)?片菌褶,并用75%酒精涂抹消毒,再將其貼到斜面試管上方的管壁上,并立即豎放到廣口瓶或紙盒內(nèi)。在瓶或盒底部放一層棉花(最好用脫脂消毒棉),固定住試管,以防止試管滑動。然后輕輕調(diào)整試管方向,使表面呈凸凹放射狀排列的菌褶面向試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基,以便彈射孢子能自由降落到培養(yǎng)基上。在18℃溫度下,一般放置12小時,斜面培養(yǎng)基上即可看到與呈放射狀排列的菌褶形狀相似的模糊的孢子印。此時,在無菌接種室或接種箱內(nèi),用接種鉤將貼附的菌褶取出并塞上無菌脫脂棉塞。封閉管口,以免落下成熟過遲的孢子,然后豎立在26℃溫度下進行培養(yǎng)。3天后,孢子呈棉花團狀萌發(fā),10天左右,菌絲即可長滿試管斜面。然后再在無菌接種室或箱內(nèi),用接種針將載有菌絲的小塊移入另一斜面試管培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng),這樣重復2次,進行無雜菌培養(yǎng)。經(jīng)感官鑒定:分離培養(yǎng)的菌種菌絲密集、粗壯有力,氣生菌絲發(fā)達,爬壁性強,不分泌色素,菌絲生長速度快,耐高溫,在34℃溫度下照常生長而不發(fā)黃,25℃溫度下約8天可長滿試管斜面,在低溫下保存易形成籽實體。通過出菇試驗,證明這種方法產(chǎn)量高、周期短、抗雜菌污染能力強,可選擇出優(yōu)良菌株并作為原始純菌種轉(zhuǎn)擴再用于生產(chǎn)。
2. 孢子快速分離法
在乎菇孢子大量散發(fā)出現(xiàn)煙霧狀時,可采用醫(yī)用注射器進行孢子快速分離而獲得純菌種。平菇孢子分離的菌種生理年齡小,生活力旺盛,常被當作菌種復壯的方法之一。
具體方法如下:
?、?用100毫升的醫(yī)用注射針管和長針頭,經(jīng)75%酒精消毒后,吸入40毫升的無菌水。
?、?推出注射器中的空氣,將針管頭插入菇體孢子彈射的煙霧圈中,拔出針頭,將針管后拉,使煙霧中的部分孢子隨針頭管后拉的吸力進入管內(nèi),然后立即插上針頭并晃動針管,使吸入的孢子與無菌水混合均勻,即成孢子液。
③ 用酒精棉球擦試針頭后,將針頭插穿PDA培養(yǎng)基斜面試管上的棉塞,稍壓推管,滴入3滴孢子液在斜面培養(yǎng)基上,輕輕晃動試管使其均勻鋪開在斜面上。
?、?將斜面試管水平置于24℃~26℃下培養(yǎng),待孢子萌發(fā)時,挑選無雜菌污染、潔白、健壯的菌絲,在無菌接種室或接種箱內(nèi)轉(zhuǎn)管2次,進行純化培養(yǎng)。經(jīng)過出菇試驗后,選擇優(yōu)良菌株作為純種。
注意事項:操作者要戴口罩、手套,并穿著白色醫(yī)用隔離衣。操作前出菇房最好先通風,并根據(jù)實際情況進行噴霧,使已彈射的孢子沉降地面,以免危害人的身體健康。
作者:山東省東營市東營區(qū)六戶鎮(zhèn)油田南苑新村1組51號信箱 李樹國 257083 摘自:《農(nóng)村實用科技》
編者提示:生產(chǎn)中常把孢子分離法(有性繁殖)與組織分離法(無性繁殖)結(jié)合起來使用。這是因為平菇屬于異宗結(jié)實的品種,上述采用孢子分離得到的平菇菌種中有部份是沒有結(jié)實能力的單核菌絲(只有經(jīng)過質(zhì)配的雙核菌絲才有結(jié)實能力),所以不宜直接用作生產(chǎn)用種;而應先進行出菇試驗,從中取合乎該品種特征、性狀優(yōu)良的個體作母本再進行組織分離,再篩選出其中的優(yōu)良菌株用于大面積栽培。
1. 褶片貼附分離法
利用成熟菇體的菌蓋所產(chǎn)生的孢子進行培養(yǎng)而獲得純正菌種。其過程是:首先制備好PDA試管斜面培養(yǎng)基。配備培養(yǎng)基的用品是馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20克、水1000毫升。將試管存放在14℃~18℃環(huán)境中干燥2天~3天,當試管壁上沒有游離水珠時,即可進行分離,方法是:選用菇形圓整、菌蓋肥厚、健壯、無病蟲危害、七八成熟的平菇作為分離菌種原材料,在黑暗處借用手電筒的光束,可看到形似白色粉筆灰狀的孢子彈射的狀況。平菇孢子的成熟次序是由基部,即靠近菇體菌柄的一端呈帶狀向前緣推移,在其菌蓋前緣隆起處便是孢子彈射最活躍的部位,在此處剪一段,約1厘米~1.5厘米寬的菌褶,用鑷子剝?nèi)?片菌褶,并用75%酒精涂抹消毒,再將其貼到斜面試管上方的管壁上,并立即豎放到廣口瓶或紙盒內(nèi)。在瓶或盒底部放一層棉花(最好用脫脂消毒棉),固定住試管,以防止試管滑動。然后輕輕調(diào)整試管方向,使表面呈凸凹放射狀排列的菌褶面向試管內(nèi)的斜面培養(yǎng)基,以便彈射孢子能自由降落到培養(yǎng)基上。在18℃溫度下,一般放置12小時,斜面培養(yǎng)基上即可看到與呈放射狀排列的菌褶形狀相似的模糊的孢子印。此時,在無菌接種室或接種箱內(nèi),用接種鉤將貼附的菌褶取出并塞上無菌脫脂棉塞。封閉管口,以免落下成熟過遲的孢子,然后豎立在26℃溫度下進行培養(yǎng)。3天后,孢子呈棉花團狀萌發(fā),10天左右,菌絲即可長滿試管斜面。然后再在無菌接種室或箱內(nèi),用接種針將載有菌絲的小塊移入另一斜面試管培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng),這樣重復2次,進行無雜菌培養(yǎng)。經(jīng)感官鑒定:分離培養(yǎng)的菌種菌絲密集、粗壯有力,氣生菌絲發(fā)達,爬壁性強,不分泌色素,菌絲生長速度快,耐高溫,在34℃溫度下照常生長而不發(fā)黃,25℃溫度下約8天可長滿試管斜面,在低溫下保存易形成籽實體。通過出菇試驗,證明這種方法產(chǎn)量高、周期短、抗雜菌污染能力強,可選擇出優(yōu)良菌株并作為原始純菌種轉(zhuǎn)擴再用于生產(chǎn)。
2. 孢子快速分離法
在乎菇孢子大量散發(fā)出現(xiàn)煙霧狀時,可采用醫(yī)用注射器進行孢子快速分離而獲得純菌種。平菇孢子分離的菌種生理年齡小,生活力旺盛,常被當作菌種復壯的方法之一。
具體方法如下:
?、?用100毫升的醫(yī)用注射針管和長針頭,經(jīng)75%酒精消毒后,吸入40毫升的無菌水。
?、?推出注射器中的空氣,將針管頭插入菇體孢子彈射的煙霧圈中,拔出針頭,將針管后拉,使煙霧中的部分孢子隨針頭管后拉的吸力進入管內(nèi),然后立即插上針頭并晃動針管,使吸入的孢子與無菌水混合均勻,即成孢子液。
③ 用酒精棉球擦試針頭后,將針頭插穿PDA培養(yǎng)基斜面試管上的棉塞,稍壓推管,滴入3滴孢子液在斜面培養(yǎng)基上,輕輕晃動試管使其均勻鋪開在斜面上。
?、?將斜面試管水平置于24℃~26℃下培養(yǎng),待孢子萌發(fā)時,挑選無雜菌污染、潔白、健壯的菌絲,在無菌接種室或接種箱內(nèi)轉(zhuǎn)管2次,進行純化培養(yǎng)。經(jīng)過出菇試驗后,選擇優(yōu)良菌株作為純種。
注意事項:操作者要戴口罩、手套,并穿著白色醫(yī)用隔離衣。操作前出菇房最好先通風,并根據(jù)實際情況進行噴霧,使已彈射的孢子沉降地面,以免危害人的身體健康。
作者:山東省東營市東營區(qū)六戶鎮(zhèn)油田南苑新村1組51號信箱 李樹國 257083 摘自:《農(nóng)村實用科技》
編者提示:生產(chǎn)中常把孢子分離法(有性繁殖)與組織分離法(無性繁殖)結(jié)合起來使用。這是因為平菇屬于異宗結(jié)實的品種,上述采用孢子分離得到的平菇菌種中有部份是沒有結(jié)實能力的單核菌絲(只有經(jīng)過質(zhì)配的雙核菌絲才有結(jié)實能力),所以不宜直接用作生產(chǎn)用種;而應先進行出菇試驗,從中取合乎該品種特征、性狀優(yōu)良的個體作母本再進行組織分離,再篩選出其中的優(yōu)良菌株用于大面積栽培。