【作者】姜寧宋春艷劉建雨譚琦章爐軍尚曉冬

【機(jī)構(gòu)】上海海洋大學(xué)食品學(xué)院上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所國家食用菌工程技術(shù)研究中心

摘要：香菇Lentinula edodes是世界第二大食藥用真菌,隨著其全基因組測序的完成,功能基因組學(xué)研究也逐漸展開,建立穩(wěn)定的香菇轉(zhuǎn)化體系是目前的研究熱點(diǎn)。本文將探索以農(nóng)桿菌為介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系在香菇中進(jìn)行隨機(jī)插入突變的轉(zhuǎn)化效率以及穩(wěn)定性。構(gòu)建的質(zhì)粒p YN6982以潮霉素抗性基因hyg作為篩選標(biāo)記基因,以增強(qiáng)型熒光蛋白基因egfp作為報(bào)告基因,以農(nóng)桿菌EHA105和LBA4404為介導(dǎo),同時(shí)轉(zhuǎn)化了孢子單核體、原生質(zhì)體單核體和雙核體菌株。結(jié)果表明采用小米粒培養(yǎng)基進(jìn)行菌絲培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化,經(jīng)潮霉素抗性篩選,以及5代傳代后,對轉(zhuǎn)化子中的hyg和egfp基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測序,驗(yàn)證了轉(zhuǎn)化子的遺傳穩(wěn)定性。經(jīng)過熒光顯微觀察表明,EGFP在轉(zhuǎn)化子中可穩(wěn)定表達(dá)。本研究探索出一種采用小米粒培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲并進(jìn)行轉(zhuǎn)化的新方法,建立了穩(wěn)定的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的香菇遺傳轉(zhuǎn)化體系,為進(jìn)一步開展香菇的基因功能研究奠定了良好的基礎(chǔ)。 

 

基金：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金資助(CARS24)； 上海科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目[滬農(nóng)科攻字(2015)第5-1號]~~；

 

關(guān)鍵詞：香菇; 單核體菌絲; 農(nóng)桿菌; 潮霉素; 綠色熒光蛋白;